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Publicada el Friday, 19 May 2017

Se desarrolla prueba rápida para el diagnóstico de sepsis

Un método molecular basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite identificar pacientes con sepsis de una forma mucho más rápida que los métodos tradicionales.
Se desarrolla prueba rápida para el diagnóstico de sepsis

La sobrevida de los pacientes con sepsis depende principalmente de la rapidez con la que se realiza el diagnóstico y se da inicio al tratamiento. Por cada hora que pasa sin tratamiento antimicrobiano efectivo desde que se inicia la hipotensión arterial, bajan las probabilidades de sobrevida un 7.6%.

Hasta ahora el estándar de oro para hacer el diagnóstico de sepsis es el hemocultivo; sin embargo, éstos suelen tardar varios días para que se muestren como positivos, y ciertas bacterias no se desarrollan a tiempo haciendo que se obtengan resultados falsos negativos. Para tratar de agilizar el diagnóstico, diversos métodos moleculares se han probado para complementar los hallazgos del hemocultivo, siendo el PCR una técnica que es favorecida debido a su capacidad de hacer detecciones rápidas y con alta precisión. Sin embargo, la aplicación de esta técnica con fines diagnósticos también ha sido un reto, ya que se requiere tener un número mínimo de patógenos circulando para poder extraer material de ADN de alta calidad y pueden existir sustancias inhibidoras de la reacción de PCR en las muestras a utilizar.

Pensando en estos obstáculos, un grupo de investigadores chinos han creado un método de detección de material genético de patógenos en sangre basándose en tecnología PCR mútiplex (que permite amplificar varias secuencias de ADN a la vez) con sondas TaqMan, que consisten en oligonucleótidos que se encuentran marcados fluorescentemente y que permiten aumentar la especificidad de la detección, así como facilitar su cuantificación.

Los primers de ADN (iniciadores de la replicación de ADN) y las sondas TaqMan se diseñaron para ser complementarias a las regiones de ARN ribosomal 16S de los 10 patógenos que más comúnmente causan sepsis y se reportan presentes hasta en el 95% de los cultivos positivos:  Pseudomonas aeruginosa, Staphyloccocus aureus, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumonia, estafilococos coagulasa-negativos, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Stenotrophomonas maltophilia, y Pseudomonas cepacia.

Esta técnica de detección molecular se probó en 30 pacientes con síntomas clínicos de sepsis y los resultados se compararon con un hemocultivo. Los resultados mostraron que la detección de muestras positivas (sensibilidad) en el PCR multiplex fue de 96% a partir de 100 UFC/mL y fue del 100% para concentraciones bacterianas mayores de 1000 UFC/mL; no se tuvo reacción para bacterias no incluidas dentro de la lista de patógenos de interés. Todos los pacientes resultaron positivos utilizando esta metodología, y 12 fueron totalmente negativos para éste. Esto puede significar que éste último es deficiente para detectar oportunamente a los pacientes con sepsis o que el método es capaz de detectar residuos bacterianos resultantes de la destrucción por terapia antimicrobiana o por el mismo sistema inmune, lo que debe de estudiarse más a fondo.

Por lo pronto, este método de biología molecular se muestra prometedor para detectar a los pacientes con sepsis con una sensibilidad alta y con una duración del procedimiento corto (alrededor de 2 horas). Sin embargo, este solo es un estudio piloto y se deben hacer pruebas con un número mucho mayor de pacientes para confirmar la confiabilidad de los resultados.

 

Referencia:

Liu CF, Shi XP, Chen Y, et al. Rapid diagnosis of sepsis with TaqMan-Based multiplex real-time PCR. J Clin Lab Anal 2017; e22256. DOI: 10.1002/jcla.22256.

 

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